Agar EMB

El Agar EMB (Eosina Azul de Metileno) es un medio de cultivo selectivo y diferencial usado en microbiología para aislar bacilos Gram-negativos. Inhibe el crecimiento de bacterias Gram-positivas y permite diferenciar entre bacterias fermentadoras y no fermentadoras de lactosa/sacarosa. [1, 2, 3, 4]

Características Principales

Selectividad: Contiene los colorantes eosina y azul de metileno, además de sales biliares (dependiendo de la marca), que impiden el crecimiento de bacterias Gram-positivas. [1, 2]

Diferenciación: Los colorantes actúan como indicadores de pH que precipitan en medio ácido, revelando qué bacterias fermentan los azúcares del medio. [1, 2]

Resultados y Apariencia de las Colonias

E. coli (Fermentador vigoroso): Forma colonias características de color negro con un brillo verde metálico.

Otros fermentadores (ej. Klebsiella): Forman colonias grandes, mucosas y de color rosado oscuro o morado.

No fermentadores (ej. Salmonella, Shigella): Forman colonias incoloras, translúcidas o del color ámbar del medio.[1, 2, 3, 4]

Preparación General

Suspender la cantidad indicada por el fabricante (usualmente entre 36 y 37 gramos) por cada litro de agua purificada.

Dejar reposar unos minutos y calentar hasta ebullición para disolver por completo.

Esterilizar en autoclave a 121 °C durante 15 minutos.

Enfriar a 45-50 °C y verter en placas Petri estériles.[1, 2, 3, 4, 5]

 

Staphylococcus aureus

Staphylococcus aureus en agar sangre se identifica por formar colonias redondas, convexas y opacas (de 1 a 4 mm), con un característico pigmento amarillo dorado (que da origen a su nombre) y rodeadas por una zona clara de β-hemólisis (completa) debido a sus toxinas citolíticas. [1, 2, 3, 4, 5]

Resumen de características en cultivo

Morfología colonial: Colonias lisas, brillantes, de bordes bien definidos y elevadas.

Color: Varía de amarillo claro a dorado intenso.

Hemólisis: Presenta β-hemólisis (lisis completa de los glóbulos rojos alrededor de la colonia), aunque algunas cepas resistentes (como el SARM) pueden mostrarla débil o nula.[1, 2, 3, 4, 5]

Perfil microbiológico general

Tinción y forma: Coco Gram-positivo agrupado en racimos irregulares.

Metabolismo: Anaerobio facultativo (crece con o sin oxígeno).

Enzimas clave: Catalasa positivo (diferencia de Streptococcus) y Coagulasa positivo (diferencia de estafilococos coagulasa-negativos).[1, 2, 3, 4, 5]

 

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Streptococcus pneumoniae

Streptococcus pneumoniae en agar sangre desarrolla colonias pequeñas, redondas, de color blanco grisáceo y aspecto brillante o translúcido. Su principal característica visual es la alfa-hemólisis (hemólisis parcial), que se observa como un halo verdoso o turbio alrededor de la colonia debido a la degradación de la hemoglobina por la enzima neumolisina. [1, 2, 3, 4]

Características morfológicas y de cultivo

Apariencia: Colonias lisas y brillantes. Las cepas muy encapsuladas pueden verse grandes y mucosas.[1, 2]

Autólisis: Tras 48 horas de incubación, el centro de la colonia puede deprimirse o colapsar (en forma de "hoyuelo" o nailhead), debido a la autolisis celular. [1, 2]

Microscopía: Son cocos Gram-positivos agrupados en pares (diplococos) con una característica forma lanceolada (alargada o en punta de lanza). [1, 2, 3]

Pruebas de identificación diferencial

Para confirmar que se trata de S. pneumoniae y no de otros estreptococos alfa-hemolíticos (como los del grupo Viridans), en el laboratorio se realizan dos pruebas clave: [1, 2]

Sensibilidad a la optoquina: Es sensible (inhibición del crecimiento alrededor del disco "P").

Solubilidad en bilis: Las colonias se lisan (desaparecen) en presencia de sales biliares. [1, 2]

Streptococcus pneumoniae creciendo en agar columbia nutrido con sangre de caballo.

Hemolisis alfa. Cepa mucoide aislada de la conjuntiva de un niño de seis semanas de edad.

Imagen. Nathan Reading on Flickr - 

https://www.flickr.com/photos/nathanreading/6002927374/

Morfología colonial de Streptococcus pneumoniae en gelosa sangre de carnero al 5 %

Se observa una hemólisis tipo α (alfa)

Créditos: ENCB-IPN Dra. Graciela Castro Escarpulli

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Cultivo de S. pneumoniae en agar sangre. El halo verdoso alrededor de las colonias nos indica que es alfa-hemolitico.^{[nota 1]} Se observa una zona donde no hay crecimiento alrededor del disco blanco, que contiene optoquina. La sensibilidad del neumococo a este compuesto se utiliza en su identificación.

Imagen. https://es.wikipedia.org/wiki/Streptococcus_pneumoniae

Streptococcus pyogenes

Streptococcus pyogenes (Estreptococo Beta-hemolítico del Grupo A) en agar sangre se identifica principalmente por producir β-hemólisis completa (un halo claro y transparente alrededor de las colonias debido a la lisis de glóbulos rojos), formando colonias pequeñas, blancas o grisáceas, lisas y translúcidas. [1, 2, 3, 4]

Características morfológicas y de cultivo

Tipo de hemólisis: β-hemólisis intensa y bien definida.

Aspecto de la colonia: Blancas, grisáceas o translúcidas, brillantes y de tamaño pequeño (aproximadamente 1 a 2 mm de diámetro).

Tiempo de incubación: Se observa el desarrollo característico tras 18 a 24 horas a una temperatura de 35 a 37 °C.[1, 2, 3, 4]

Pruebas de laboratorio complementarias

Para confirmar su identidad frente a otros cocos grampositivos, se realizan las siguientes pruebas bioquímicas:

Catalasa: Negativo (no produce burbujas al contacto con peróxido de hidrógeno).

Sensibilidad a la Bacitracina: Sensible (a diferencia de otros estreptococos β-hemolíticos como los del Grupo B).

Agrupación de Lancefield: Perteneciente al Grupo A (presencia del antígeno de carbohidrato C).[1, 2, 3, 4]

Streptococcus pyogenes

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Streptococcus pyogenes

Por Nathan Reading from Halesowen, UK - Streptococcus pyogenes

(Lancefield Group A) on Columbia Horse Blood Agar, CC BY 2.0,

https://commons.wikipedia.org/w/index.php?curid=19000648

Streptococcus pyogenes

Por Nathan Reading from Halesowen, UK - Streptococcus pyogenes (Lancefield Group A) on Columbia Horse Blood Agar- detail 2, CC BY 2.0, https://commons.wikimedia.org/w/index.php?curid=19000932

Toma de muestras sanguineas

Tubos de recolección de sangre al vacío, agujas, etc.

Creatinina