Coombs directa
La prueba de Coombs directa detecta anticuerpos unidos a los hematíes del paciente (sensibilización en el propio organismo), y es positiva en anemias hemolíticas autoinmunes, anemias hemolíticas inducidas por fármacos, hematíes fetales en la enfermedad hemolítica del recién nacido o hematíes transfundidos en reacciones transfusionales de naturaleza inmune.
Procedimiento de la Prueba antiglobulina directa
Se emplea para demostrar la absorción “in vivo” de IgG y/o fracciones del complemento en la superficie de los glóbulos rojos.
1) Preparar una suspensión de glóbulos rojos a probar en PBS al 3%.
2) En un tubo de hemólisis colocar 1 gota de esta suspensión.
3) Lavar los glóbulos 3 veces con PBS. Asegurarse de remover la mayor cantidad posible de solución salina al final de cada lavado, de manera de obtener un botón celular “seco”. Descartar completamente el sobrenadante luego del último lavado.
4) Agregar 2 gotas de Suero Anti-humano (poliespecífico) al botón de células.
Mezclar perfectamente y centrifugar durante 15 segundos a 1.000 g.
5) Agitar suavemente el tubo a fin de deshacer el botón celular y observar macroscópicamente. La observación puede facilitarse si se emplea una fuente de luz difusa.
Tener en cuenta que agitaciones demasiado vigorosas pueden dar lugar a lecturas negativas de un aglutinado débil (falso negativo).
6) Los resultados negativos deben confirmarse por adición de glóbulos rojos sensibilizados con IgG débiles (Control de Coombs).
Coombs indirecta
La prueba de Coombs indirecta detecta anticuerpos libres en el suero del paciente (se provoca la sensibilización in vitro de hematíes y posteriormente se añade la antiglobulina).
Estos anticuerpos pueden surgir como consecuencia de la transfusión de sangre no compatible para el antígeno Rh (anticuerpos anti-D) u otros antígenos eritrocitarios, o cuando existe comunicación hemática materno-fetal durante la gestación o el parto cuando la madre es Rh — y el feto Rh+.
Procedimiento de la prueba antiglobulina indirecta (en solución fisiológica de baja fuerza iónica).
El empleo de esta solución permite reducir el tiempo de incubación a 15 minutos.
Los glóbulos rojos deben lavarse 2 veces con PBS y una vez con LISS.
Finalmente preparar con esta solución una suspensión de glóbulos rojos al 3%.
1) Colocar en un tubo de hemólisis 1 gota de suero a probar.
2) Agregar 1 gota de glóbulos rojos a probar al 3% en LISS.
3) Mezclar e incubar a 37°C durante 15 minutos en baño de agua.
4) Lavar los glóbulos 3 veces con PBS. Asegurarse de remover la mayor cantidad posible de solución salina al final de cada lavado, de manera de obtener un botón celular “seco”. Descartar completamente el sobrenadante luego del último lavado.
5) Agregar 2 gotas de Suero Anti-humano (poliespecífico) al botón de células. Mezclar perfectamente y centrifugar durante 15 segundos a 1.000 g.
6) Agitar suavemente el tubo a fin de deshacer el botón celular y observar macroscópicamente. La observación puede si se emplea una fuente de luz difusa.
Tener en cuenta que agitaciones demasiado vigorosas pueden dar lugar a lecturas negativas de un aglutinado débil (falso negativo).
7) Los resultados negativos deben confirmarse por adición de glóbulos rojos sensibilizados con IgG débiles (Control de Coombs).
Interpretación de los resultados
La observación de aglutinación (con cualquiera de las técnicas empleadas) en presencia del Suero Anti-humano (poliespecífico) indica la presencia de IgG o componentes del complemento en la membrana del glóbulo rojo; la reacción es positiva.
Si no se observa aglutinación, la reacción es negativa.
