Para la identificación de bacterias, principalmente Enterobacterias basándose en la utilización del citrato, como única fuente de carbono.
El citrato de sodio es la única fuente de carbono.
El cloruro de sodio mantiene el equilibrio osmótico del medio.
Cuando las bacterias utilizan el citrato, el medio se alcaliniza y cambia el color inicial verde (neutro), que esta dado por la presencia del azul de bromotimol a color azul (alcalino, prueba positiva).
La reacción negativa se manifiesta por ausencia de crecimiento y no hay cambio de color
Salmonella typhi, Salmonella paratyphi y Shigella se pueden diferenciar de Salmonella schottmuelleri, Salmonella enteritidis y Salmonella typhimurium siendo este ultimo capaz de utilizar el citrato, mientras que el primero no puede hacerlo.
El medio se puede emplear de la misma forma que el citrato de Koser para realizar la prueba de utilización del citrato como una de las reacciones del IMVIC.
Este medio indica la capacidad de las bacterias de metabolizar el citrato.
Contiene citrato como única fuente de carbono, fosfato de amonio como única fuente de fosfato y azul de bromotimol como indicador de pH.
Únicamente las bacterias capaces de metabolizar citrato podrán multiplicarse en este medio, al utilizar los fosfatos presentes liberan iones amonio (básicos) que junto con la eliminación de citrato (ácido) generará una fuerte basificación del medio que será aparente con un cambio de color del indicador de pH de verde a azul.
Esta prueba sirve para determinar si un organismo es capaz de utilizar citrato como única fuente de carbono y compuestos amoniacales como única fuente de nitrógeno en su metabolismo, provocando una alcalinización del medio.
Entre las enterobacterias estas características se dan en los siguientes géneros:
Enterobacter, Klebsiella, Serratia, Citrobacter y algunas especies de Salmonella.
Sin embargo, Escherichia, Shigella, Salmonella typhi y Salmonella paratyphi son incapaces de crecer con esos nutrientes.
Se cultiva el microorganismo en agar citrato de Simmons.
Este medio contiene citrato de sodio y fosfato de amonio como fuentes de carbono y de nitrógeno respectivamente y azul de bromotimol como indicador de pH.
Sólo las bacterias capaces de metabolizar el citrato podrán multiplicarse en este medio y liberarán iones amonio lo que, junto con la eliminación del citrato (ácido), generará una fuerte basificación del medio que será aparente por un cambio de color del indicador de pH, de verde a azul.
Es uno de los test del IMVIC usado para diferenciar enterobacterias.
Hay microorganismos capaces de utilizar el citrato como única fuente de carbono produciendo alcalinidad.
La prueba se realiza en tubos de medio sólido muy inclinados, ya que la utilización se produce sólo en condiciones aerobias, que contienen un indicador de pH que vira de color verde a azul al alcalinizarse el medio.
La utilización de citrato como única fuente de carbono es una prueba útil en la identificación de enterobacterias.
La utilización de citrato como única fuente de carbono se detecta en un medio de cultivo con citrato como única fuente de carbono mediante el crecimiento y la alcalinización del medio.
Este aumento de pH se visualiza con el indicador azul de bromotimol que vira al alcalino a pH 7,6.
Procedimiento
Se inocula la superficie del agar inclinado con una sola estría en el pico.
Utilizar un cultivo de 24 horas en un medio sólido y cuidando no arrastrar medio de cultivo, ya que se pueden producir falsos positivos por crecimiento a partir del medio de cultivo del inóculo.
Incubar a 35°C durante 4 días.
Interpretación
El ensayo es positivo cuando se observa crecimiento a lo largo de la estría, acompañado o no de un viraje del indicador al azul.
Controles
Positivo: Klebsiella spp.
Negativo: E.coli
Medio de cultivo: Citrato de Simmons
Composición:
a) Sulfato de magnesio
b) Monofosfato de amonio
c) Fosfato dipotásico
d) Citrato de sodio
e) Cloruro de sodio
f) Agar
g) Agua destilada
h) Indicador de pH: Azul de bromotimol (pH= 6)
Alcalino: color azul de Prusia intenso (pH = 7.6)
Medio no inoculado: Color verde (pH = 6.9)
Fundamento
Determina si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como única fuente de carbono para el metabolismo y crecimiento, provocando alcalinidad.
El medio incluye citrato de sodio, un anión como única fuente de carbono y fosfato de amonio como única fuente de nitrógeno.
Normalmente el metabolismo del citrato comprende una condensación de acetilo con la coenzima A y oxalacetato para entrar en el ciclo de Krebs.
El desdoblamiento del citrato comprende un sistema enzimático sin la intervención de la coenzima A.
Esta enzima se denomina citritasa o citrato desmolasa.
Los productos obtenidos del metabolismo del citrato dependen del pH del medio:
Consistencia del medio: Sólido inclinado (pico de flauta)
Inoculación
Se toma una colonia bien aislada de la superficie del medio de aislamiento primario y se inocula como una estría única en la superficie del pico de flauta.
Incubación: Tiempo = 24 - 48 horas
Temperatura = 35 - 37° C
Precauciones: El inóculo debe ser liviano.
Sí éste es demasiado grande, compuestos orgánicos preformados dentro de la pared celular de las bacterias que están muriendo pueden liberar suficiente carbono y nitrógeno como para dar un resultado falso – positivo.
Cuando se inocula una serie de tubos de medios de cultivo diferenciales con un microorganismo desconocido, es importante sembrar primero el medio citratado para prevenir el arrastre de proteínas o carbohidratos de los otros medios, aunque se supone se esteriliza el asa en cada inoculación.
Preparación.
1. Rehidratar 24.4 g del medio en un litro de agua destilada.
2. Reposar 10 a 15 minutos.
3. Calentar agitando hasta el punto de ebullición durante 1 minuto para disolverlo por completo.
4. Distribuir volúmenes de 3 a 5 ml en tubos de 13 X 100 mm.
5. Esterilizar a 121°C (15 lbs. de presión) durante 15 minutos.
6. Enfriar en posición inclinada de manera que el medio en el fondo del tubo alcance una profundidad de 1.0 a 1.5 cm.
7. Conservar en refrigeración de 2 a 8°C.
Positivo: Klebsiella spp.
Negativo: E.coli
Medio de cultivo: Citrato de Simmons
Composición:
a) Sulfato de magnesio
b) Monofosfato de amonio
c) Fosfato dipotásico
d) Citrato de sodio
e) Cloruro de sodio
f) Agar
g) Agua destilada
h) Indicador de pH: Azul de bromotimol (pH= 6)
Alcalino: color azul de Prusia intenso (pH = 7.6)
Medio no inoculado: Color verde (pH = 6.9)
Fundamento
Determina si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como única fuente de carbono para el metabolismo y crecimiento, provocando alcalinidad.
El medio incluye citrato de sodio, un anión como única fuente de carbono y fosfato de amonio como única fuente de nitrógeno.
Normalmente el metabolismo del citrato comprende una condensación de acetilo con la coenzima A y oxalacetato para entrar en el ciclo de Krebs.
El desdoblamiento del citrato comprende un sistema enzimático sin la intervención de la coenzima A.
Esta enzima se denomina citritasa o citrato desmolasa.
Los productos obtenidos del metabolismo del citrato dependen del pH del medio:
Consistencia del medio: Sólido inclinado (pico de flauta)
Inoculación
Se toma una colonia bien aislada de la superficie del medio de aislamiento primario y se inocula como una estría única en la superficie del pico de flauta.
Incubación: Tiempo = 24 - 48 horas
Temperatura = 35 - 37° C
Precauciones: El inóculo debe ser liviano.
Sí éste es demasiado grande, compuestos orgánicos preformados dentro de la pared celular de las bacterias que están muriendo pueden liberar suficiente carbono y nitrógeno como para dar un resultado falso – positivo.
Cuando se inocula una serie de tubos de medios de cultivo diferenciales con un microorganismo desconocido, es importante sembrar primero el medio citratado para prevenir el arrastre de proteínas o carbohidratos de los otros medios, aunque se supone se esteriliza el asa en cada inoculación.
Preparación.
1. Rehidratar 24.4 g del medio en un litro de agua destilada.
2. Reposar 10 a 15 minutos.
3. Calentar agitando hasta el punto de ebullición durante 1 minuto para disolverlo por completo.
4. Distribuir volúmenes de 3 a 5 ml en tubos de 13 X 100 mm.
5. Esterilizar a 121°C (15 lbs. de presión) durante 15 minutos.
6. Enfriar en posición inclinada de manera que el medio en el fondo del tubo alcance una profundidad de 1.0 a 1.5 cm.
7. Conservar en refrigeración de 2 a 8°C.
No hay comentarios.:
Publicar un comentario