Este Blog se realiza con la finalidad de apoyar a los profesionales que laboran en laboratorios clínicos y bancos de sangre
sábado, 17 de junio de 2017
jueves, 8 de junio de 2017
sábado, 3 de junio de 2017
Cobas e 601
Módulo de inmunoanálisis heterogéneo multicanal, selectivo para la realización de determinaciones de inmunoquímica (hormonas - función tiroidea y fertilidad - marcadores tumorales, perfil cardíaco y óseo, anemias, diabetes y serología infecciosa).
lunes, 22 de mayo de 2017
sábado, 20 de mayo de 2017
Medio LIA
Este ensayo permite diferenciar los microorganismos que producen descarboxilación o desaminación de la lisina.
Se puede detectar además la producción de H2S.
Es muy utilizado en las técnicas de búsqueda de Salmonella, principalmente para descartar otras bacterias que dan colonias de aspecto similar en los medios diferenciales utilizados durante el aislamiento selectivo.
Durante las primeras etapas de la incubación el fondo virará el indicador de pH del medio al ácido (amarillo) por la fermentación de glucosa.
Luego, si el aminoácido es descarboxilado se formarán aminas que provocan un retorno al color original del medio o hacia un viraje al básico (color violeta).
En la desaminación se produce un ácido carboxílico y NH3 y se visualiza en la superficie la aparición de un color rojo intenso.
La producción de H2S a partir de tiosulfato se visualiza por la precipitación de sulfuro ferroso de color negro.
viernes, 19 de mayo de 2017
Citrato de Simmons
Para la identificación de bacterias, principalmente Enterobacterias basándose en la utilización del citrato, como única fuente de carbono.
El citrato de sodio es la única fuente de carbono.
El cloruro de sodio mantiene el equilibrio osmótico del medio.
Cuando las bacterias utilizan el citrato, el medio se alcaliniza y cambia el color inicial verde (neutro), que esta dado por la presencia del azul de bromotimol a color azul (alcalino, prueba positiva).
La reacción negativa se manifiesta por ausencia de crecimiento y no hay cambio de color
Salmonella typhi, Salmonella paratyphi y Shigella se pueden diferenciar de Salmonella schottmuelleri, Salmonella enteritidis y Salmonella typhimurium siendo este ultimo capaz de utilizar el citrato, mientras que el primero no puede hacerlo.
El medio se puede emplear de la misma forma que el citrato de Koser para realizar la prueba de utilización del citrato como una de las reacciones del IMVIC.
domingo, 14 de mayo de 2017
sábado, 13 de mayo de 2017
Muestra de orina
Instrucciones para el paciente
Para paciente masculino:
Para paciente femenino:
• Lave sus manos con agua y jabón antes de obtener la muestra
• Separe sus labios
• Limpie sus genitales externos, de adelante hacia atrás, con tres toallas húmedas
• Seque con una toalla seca
• Deje salir un primer chorro a la taza del baño
• Deposite la siguiente porción en el frasco
• Elimine el resto en la taza del baño
• Tape el frasco evitando tocar el interior y entregarlo en el laboratorio lo antes posible
Para paciente masculino:
• Lave sus manos con agua y jabón antes de obtener la muestra
• Retraiga la piel del pene y lave la salida de la uretra con una toalla mojada (con pura agua)
• Limpie y seque con una toalla seca
• Deje salir un primer chorro a la taza del baño
• Deposite la siguiente porción en el frasco
• Elimine el resto en la taza del baño
• Tape el frasco evitando tocar el interior y entregarlo en el laboratorio lo antes posible
Para paciente femenino:
• Lave sus manos con agua y jabón antes de obtener la muestra
• Separe sus labios
• Limpie sus genitales externos, de adelante hacia atrás, con tres toallas húmedas
• Seque con una toalla seca
• Deje salir un primer chorro a la taza del baño
• Deposite la siguiente porción en el frasco
• Elimine el resto en la taza del baño
• Tape el frasco evitando tocar el interior y entregarlo en el laboratorio lo antes posible
Guía práctica
para la estandarización del procesamiento y examen de las muestras de orina.Por: M. en C. Vicente de Mária
y Campos Otegui. BIO-RAD.
Sistema Kova
Sistema Kova para estandarización de la cuenta microscópica de partículas en el sedimento urinario.
Es un equipo de material plástico desechable y estandarizado para controlar el volumen en el tubo, resuspender el sedimento en un volumen fijo y contar las partículas microscópicas en una cámara de cuenta estandarizada.
Guía práctica para la estandarización del procesamiento y examen de las muestras de orina.Por: M. en C. Vicente de Mária y Campos Otegui. BIO-RAD.
domingo, 7 de mayo de 2017
Tira reactiva
La tira reactiva utilizada para la determinación del pH y densidad y la investigación de elementos químicos en el examen de orina de rutina es constituida por un soporte plástico conteniendo áreas impregnadas con reactivos químicos.
Se produce una reacción de color cuando las área de química seca entran en contacto con la orina.
sábado, 6 de mayo de 2017
Fasciola hepática
Parásito cuyo hospedero definitivo es el ganado vacuno; sin embargo, en algunas ocasiones, el parásito adulto puede habitar el hígado del humano donde pone sus huevos que salen por los conductos biliares y se excretan con la materia fecal.
Huevo. Solución salina. Es grande de forma elíptica, operculado* y de color pardo amarillento, mide de 130 a 140 μm de largo por 63 a 90 μm de ancho y está cubierto por una membrana gruesa y definida.
En su interior se observa una masa granulosa y el embrión no se observa porque a la materia fecal llega el huevo sin madurar.
Tinción con lugol. Tiene las mismas características descritas para solución salina, pero con lugol se tiñe tan intensamente que es difícil hacer el diagnóstico.
*opérculo. Cubierta o tapa de los huevos de algunos platelmintos.
Atlas de Parasitología - M. Montoya et al. - 1º (2011)
viernes, 5 de mayo de 2017
Desviaciones
Cuando en la medición de leucocitos se ven células jóvenes aparecen los neutrófilos en forma de núcleo en forma de bastón (cayados), y un aumento del porcentaje de los glóbulos blancos polimorfonucleares. esto se denomina como "desviación a la izquierda". Este término sugiere infecciones bacterianas agudas.
La "desviación a la derecha" se dice cuando el porcentaje de linfocitos y monocitos se encuentra aumentado con respecto al de los polimorfonucleares (neutrófilos, eosinófilos y basófilos), se asocia en general a enfermedades víricas.
- See more at: http://hepato.com/p_imune/003_imune_esp.php#sthash.qfH3N01t.dpuf
miércoles, 3 de mayo de 2017
Autoclave
Manejo del autoclave
a) Debe haber suficiente agua destilada en el fondo del autoclave
b) Colocar el material convenientemente tapado (algodón hidrófobo, gasa, papel craft) en un cesto metálico
c) Cerrar herméticamente la tapa
d) Encender el sistema calórico y abrir la llave de escape para eliminar el aire (que es desplazado por el propio vapor), ya que si éste permanece en el interior alterará la relación temperatura – presión
e) Asegurarse que salga todo el aire residual (hasta que comience a salir vapor de agua)
f) Inmediatamente cerrar la llave de escape de vapor
g) Comienza a acumularse el vapor (indicado en el manómetro) y a aumentar la temperatura
h) Cuando se llegue a la temperatura y presión deseada (121°C), se debe regular el gas para mantener estos valores constantes. Si es una autoclave eléctrica se regula automáticamente mediante un termorregulador
i) Transcurrido el tiempo necesario (15 a 20 minutos) se corta la fuente calórica
j) La llave de escape de vapor se abre ligeramente para evacuar lentamente el vapor del autoclave
k) Cuando la presión marque cero, se puede abrir el autoclave y retirar el material para evitar un sobrecalentamiento
Precauciones en el uso del Autoclave:
a) El autoclave se debe cargar distribuyendo en material en forma homogénea, evitando la formación de bolsas de vacío
b) Evitar sobrecargar el autoclave, ya que impide la circulación homogénea del vapor
c) La causa más frecuente de fallas de esterilización es la evacuación incompleta del aire, lo que no permite que la temperatura alcance el nivel deseado aún cuando la presión si lo haga. De ahí la importancia que el equipo tenga ambos marcadores
d) Si se utiliza material con tapas roscas, éstas no deben estar completamente cerradas para permitir la entrada del vapor.
Esterilización
Se define como la destrucción completa o eliminación total de los microorganismos patógenos y saprófitos que se encuentran en el interior o en la superficie de objetos y sustancias.
El criterio práctico de la esterilidad es la ausencia de crecimiento microbiano en un medio adecuado.
La eliminación de los microorganismos puede efectuarse mediante procesos físicos, mecánicos o químicos.
Los métodos físicos y mecánicos se incluyen en el término esterilización y los métodos químicos en el concepto de desinfección.
El método escogido para esterilizar un producto depende fundamentalmente de su naturaleza y estabilidad frente al calor u otros agentes esterilizantes.
Así por ejemplo, cuando se necesite agregar suero equino a un medio de cultivo líquido, para enriquecerlo, no se puede aplicar calor para esterilizarlo, ya que se produciría la coagulación de las proteínas del suero alterando su composición.
Situación semejante ocurre con otras sustancias o materiales termolábiles, para los cuales se utilizan métodos de esterilización que no alteren su estabilidad, uniformidad o identidad de dichas sustancias o materiales.
https://es.wikibooks.org/wiki/Microbiolog%C3%ADa/Esterilizaci%C3%B3n
Imagen.https://es.slideshare.net/Tatiitacegu/desinfeccion-y-esterilizacion-preventiva
martes, 2 de mayo de 2017
Prueba de Coombs
La prueba de Coombs sirve para detectar la existencia de anticuerpos frente a algún antígeno eritrocitario mediante la adición de suero antiglobulina humana o anticomplemento.
Coombs directa
La prueba de Coombs directa detecta anticuerpos unidos a los hematíes del paciente (sensibilización en el propio organismo), y es positiva en anemias hemolíticas autoinmunes, anemias hemolíticas inducidas por fármacos, hematíes fetales en la enfermedad hemolítica del recién nacido o hematíes transfundidos en reacciones transfusionales de naturaleza inmune.
Procedimiento de la Prueba antiglobulina directa
Se emplea para demostrar la absorción “in vivo” de IgG y/o fracciones del complemento en la superficie de los glóbulos rojos.
1) Preparar una suspensión de glóbulos rojos a probar en PBS al 3%.
2) En un tubo de hemólisis colocar 1 gota de esta suspensión.
3) Lavar los glóbulos 3 veces con PBS. Asegurarse de remover la mayor cantidad posible de solución salina al final de cada lavado, de manera de obtener un botón celular “seco”. Descartar completamente el sobrenadante luego del último lavado.
4) Agregar 2 gotas de Suero Anti-humano (poliespecífico) al botón de células.
Mezclar perfectamente y centrifugar durante 15 segundos a 1.000 g.
5) Agitar suavemente el tubo a fin de deshacer el botón celular y observar macroscópicamente. La observación puede facilitarse si se emplea una fuente de luz difusa.
Tener en cuenta que agitaciones demasiado vigorosas pueden dar lugar a lecturas negativas de un aglutinado débil (falso negativo).
6) Los resultados negativos deben confirmarse por adición de glóbulos rojos sensibilizados con IgG débiles (Control de Coombs).
Coombs indirecta
La prueba de Coombs indirecta detecta anticuerpos libres en el suero del paciente (se provoca la sensibilización in vitro de hematíes y posteriormente se añade la antiglobulina).
Estos anticuerpos pueden surgir como consecuencia de la transfusión de sangre no compatible para el antígeno Rh (anticuerpos anti-D) u otros antígenos eritrocitarios, o cuando existe comunicación hemática materno-fetal durante la gestación o el parto cuando la madre es Rh — y el feto Rh+.
Procedimiento de la prueba antiglobulina indirecta (en solución fisiológica de baja fuerza iónica).
El empleo de esta solución permite reducir el tiempo de incubación a 15 minutos.
Los glóbulos rojos deben lavarse 2 veces con PBS y una vez con LISS.
Finalmente preparar con esta solución una suspensión de glóbulos rojos al 3%.
1) Colocar en un tubo de hemólisis 1 gota de suero a probar.
2) Agregar 1 gota de glóbulos rojos a probar al 3% en LISS.
3) Mezclar e incubar a 37°C durante 15 minutos en baño de agua.
4) Lavar los glóbulos 3 veces con PBS. Asegurarse de remover la mayor cantidad posible de solución salina al final de cada lavado, de manera de obtener un botón celular “seco”. Descartar completamente el sobrenadante luego del último lavado.
5) Agregar 2 gotas de Suero Anti-humano (poliespecífico) al botón de células. Mezclar perfectamente y centrifugar durante 15 segundos a 1.000 g.
6) Agitar suavemente el tubo a fin de deshacer el botón celular y observar macroscópicamente. La observación puede si se emplea una fuente de luz difusa.
Tener en cuenta que agitaciones demasiado vigorosas pueden dar lugar a lecturas negativas de un aglutinado débil (falso negativo).
7) Los resultados negativos deben confirmarse por adición de glóbulos rojos sensibilizados con IgG débiles (Control de Coombs).
Interpretación de los resultados
La observación de aglutinación (con cualquiera de las técnicas empleadas) en presencia del Suero Anti-humano (poliespecífico) indica la presencia de IgG o componentes del complemento en la membrana del glóbulo rojo; la reacción es positiva.
Si no se observa aglutinación, la reacción es negativa.
La prueba de Coombs directa detecta anticuerpos unidos a los hematíes del paciente (sensibilización en el propio organismo), y es positiva en anemias hemolíticas autoinmunes, anemias hemolíticas inducidas por fármacos, hematíes fetales en la enfermedad hemolítica del recién nacido o hematíes transfundidos en reacciones transfusionales de naturaleza inmune.
Procedimiento de la Prueba antiglobulina directa
Se emplea para demostrar la absorción “in vivo” de IgG y/o fracciones del complemento en la superficie de los glóbulos rojos.
1) Preparar una suspensión de glóbulos rojos a probar en PBS al 3%.
2) En un tubo de hemólisis colocar 1 gota de esta suspensión.
3) Lavar los glóbulos 3 veces con PBS. Asegurarse de remover la mayor cantidad posible de solución salina al final de cada lavado, de manera de obtener un botón celular “seco”. Descartar completamente el sobrenadante luego del último lavado.
4) Agregar 2 gotas de Suero Anti-humano (poliespecífico) al botón de células.
Mezclar perfectamente y centrifugar durante 15 segundos a 1.000 g.
5) Agitar suavemente el tubo a fin de deshacer el botón celular y observar macroscópicamente. La observación puede facilitarse si se emplea una fuente de luz difusa.
Tener en cuenta que agitaciones demasiado vigorosas pueden dar lugar a lecturas negativas de un aglutinado débil (falso negativo).
6) Los resultados negativos deben confirmarse por adición de glóbulos rojos sensibilizados con IgG débiles (Control de Coombs).
Coombs indirecta
La prueba de Coombs indirecta detecta anticuerpos libres en el suero del paciente (se provoca la sensibilización in vitro de hematíes y posteriormente se añade la antiglobulina).
Estos anticuerpos pueden surgir como consecuencia de la transfusión de sangre no compatible para el antígeno Rh (anticuerpos anti-D) u otros antígenos eritrocitarios, o cuando existe comunicación hemática materno-fetal durante la gestación o el parto cuando la madre es Rh — y el feto Rh+.
Procedimiento de la prueba antiglobulina indirecta (en solución fisiológica de baja fuerza iónica).
El empleo de esta solución permite reducir el tiempo de incubación a 15 minutos.
Los glóbulos rojos deben lavarse 2 veces con PBS y una vez con LISS.
Finalmente preparar con esta solución una suspensión de glóbulos rojos al 3%.
1) Colocar en un tubo de hemólisis 1 gota de suero a probar.
2) Agregar 1 gota de glóbulos rojos a probar al 3% en LISS.
3) Mezclar e incubar a 37°C durante 15 minutos en baño de agua.
4) Lavar los glóbulos 3 veces con PBS. Asegurarse de remover la mayor cantidad posible de solución salina al final de cada lavado, de manera de obtener un botón celular “seco”. Descartar completamente el sobrenadante luego del último lavado.
5) Agregar 2 gotas de Suero Anti-humano (poliespecífico) al botón de células. Mezclar perfectamente y centrifugar durante 15 segundos a 1.000 g.
6) Agitar suavemente el tubo a fin de deshacer el botón celular y observar macroscópicamente. La observación puede si se emplea una fuente de luz difusa.
Tener en cuenta que agitaciones demasiado vigorosas pueden dar lugar a lecturas negativas de un aglutinado débil (falso negativo).
7) Los resultados negativos deben confirmarse por adición de glóbulos rojos sensibilizados con IgG débiles (Control de Coombs).
Interpretación de los resultados
La observación de aglutinación (con cualquiera de las técnicas empleadas) en presencia del Suero Anti-humano (poliespecífico) indica la presencia de IgG o componentes del complemento en la membrana del glóbulo rojo; la reacción es positiva.
Si no se observa aglutinación, la reacción es negativa.
*Buffer fosfato (PBS) pH 7,0 ± 0,2.
**Solución fisiológica de baja fuerza iónica (LISS).
La Clínica y el Laboratorio - Bacells, 22a edición
Inserto Wienner Lab.
lunes, 1 de mayo de 2017
domingo, 30 de abril de 2017
Hemoglobina Glicosilada
El seguimiento analítico de los niveles de glucosa en sangre de los diabéticos se apoya en dos parámetros:
Hemoglobinas glicosiladas para obtener los niveles medios de glucemia en los dos últimos meses.
Fructosamina para obtener el nivel medio de glucemia en las tres ultimas semanas previas a la extracción.
La glucosa sanguínea se va uniendo a la hemoglobina de forma no enzimática e irreversible durante los 120 días de vida de los hematíes.
Por tanto, la concentración de la hemoglobina glicosilada (HbAlc) es proporcional a la concentración plasmática media de glucosa durante ese período de tiempo (6-12 semanas previas).
Los valores normales oscilan entre el 4 y el 6,5%.
Contribuye a monitorizar de forma global la glucemia en el paciente diabético y sirve de guía al tratamiento, ya que es un excelente predictor de progresión de las complicaciones.
De esta forma, cuando la HbAlc media anual supera en 1,7 veces el límite superior ( >2%), se producen complicaciones en la mayoría de casos.
Así mismo, se considera que, cuando su valor es superior al 7% en dos determinaciones consecutivas, debe plantearse un cambio en la estrategia de tratamiento de la diabetes, siempre y cuando el beneficio a largo plazo de la disminución de complicaciones micro y macrovasculares supere el riesgo de hipoglucemia a corto plazo.
*La Clínica y el Laboratorio -
Bacells, 22a edición
Imagen.http://www.farestaie.com/novedades/pacientes/60-hemoglobina-glicosilada-hba1c/
Glucosa
Significación clínica.
El diagnóstico precoz y el control de los pacientes diabéticos, tienen por objeto evitar la cetoacidosis y las complicaciones resultantes de la hiperglicemia, mediante el tratamiento adecuado.
Valores de referencia
Suero o plasma
Adultos: 74 - 106 mg/dl (4,11 - 5,89 mmol/l)
Niños: 60 - 100 mg/dl (3,33 - 5,55 mmol/l)
Neonatos: 1 día: 40 - 60 mg/dl (2,22 - 3,33 mmol/l)
mayor a 1 día: 50 - 80 mg/dl (2,78 - 4,44 mmol/l)
Orina aislada fresca
1 - 15 mg/dl (0,06 - 0,83 mmol/l)
Orina de 24 horas
< 0,5 g/24 hs (< 2,78 mmol/24 hs)
LCR
Niños: 60 - 80 mg/dl (3,33 - 4,44 mmol/l)
Adultos: 40 - 70 mg/dl (2,22 - 3,89 mmol/l)
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia, teniendo en cuenta sexo, edad hábitos alimenticios y otros factores.(1)
Intolerancia a la glucosa.
Se caracteriza por valores repetidos de glucemia basal de entre 100 y 125 mg/dl o glucemias entre 140-199 mg/dl a las 2 h de una prueba de sobrecarga oral de glucosa.
Suele corresponder a una situación previa a la diabetes mellitus.
Diabetes mellitus
Definida según los criterios de la Organización Mundial de la Salud (OMS) de 1998 por valores repetidos de glucemia en ayunas mayores o iguales a 126 mg/dl.
Sintomatología de diabetes más una glucemia aleatoria igual o superior a 200 mg/dl o glucemia a los 120 min de la prueba de tolerancia oral a la glucosa > 200 mg/dl.
Estas determinaciones deben confirmarse una segunda vez, salvo en situaciones de descompensación metabólica aguda.
Diabetes gestacional.
Habitualmente cede después del parto, pero es un factor predictor de diabetes futura (el 60% de los casos desarrollan diabetes en los 15 años siguientes).
Los criterios para el diagnóstico son la superación en dos de los siguientes cuatro puntos en la prueba de sobrecarga oral con 100 g de glucosa:
Basal, 105 mg/dl;
60 min, 190 mg/dl;
120 min, 165 mg/dl;
180 min, 145 mg/dl.
Diagnostico analítico
Las pruebas de sobrecarga oral de glucosa o tolerancia pueden ser:
1.Test de O´Sullivan con 50 g de glucosa oral y determinaciones a los 0 y 60 minutos.
2.La OMS recomienda ingerir 75 g de glucosa y analizar a los 0 y 120 minutos.
3.Para gestantes se emplean 100 g de glucosa y lectura a los 0, 60, 120 y 180 minutos.
4.La prueba standard consiste en administrar 75 g de glucosa y valorar la glucemia a los 0, 30, 60, y 120 minutos.
5.El test de glucosa postprandial se basa en realizar un desayuno estandarizado y proceder a las extracciones para cuantificar la glucemia basal a los 0 minutos y la glucemia postprandial a los 60 minutos.
Glucosa postprandial.
La glucosa post-prandial (GPP) es el valor de glucosa en sangre después de ingerir alimento.
La concentración de glucosa se eleva en circulación aproximadamente 10 minutos después del inicio de la ingesta como resultado de la absorción de los hidratos de carbono de la dieta.
La concentración de GPP está determinada por la absorción, la secreción de insulina y de glucagon y sus efectos sobre el metabolismo hepático y en tejidos periféricos.
La magnitud y el momento del pico de la concentración dependen de muchos factores tales como la cantidad y la composición del alimento ingerido.
En individuos sanos el pico de glucemia es aproximadamente a los 60 minutos después del inicio de la alimentación, raramente excede los 140 mg/dl y vuelve al valor pre-prandial a las 2 o 3 horas.
(1).Inserto Wienner Lab
(2).a Clínica y el Laboratorio -
Bacells, 22a edición.
http://vademecum.labdl.com.ar/ShowTest.aspx?ID=GLUPP
http://vademecum.labdl.com.ar/ShowTest.aspx?ID=GLUPP
Cobas c111
Evaluación fotométrica con hasta 60 resultados/hora y análisis de electrolitos opcional con hasta 180 resultados/hora
Menú innovador que incluye HbA1c en sangre entera, Dímero-D y PCR de alta sensibilidad
Capacidad para realizar hasta 17 pruebas simultáneamente con paneles de indicación
Tipos de muestra: Suero, plasma, orina, sangre entera (HbA1c)
Fotómetro: 12 longitudes de onda, lámpara halógena de 20 W, medición monocromática y bicromática
Análisis que procesa:
Técnicas en Química Clinica
Es la rama de la óptica que estudia la iluminación de las superficies, iluminadas por fuentes luminosas y la intensidad de las mismas.
Turbidimetría
Es la medición de la luz transmitida a través de una suspensión, tiene la ventaja de permitir la valorización cuantitativa, sin separar el producto de la solución.
Las mediciones, pueden efectuarse con cualquier espectrofotómetro.
Se utiliza para el análisis de fibrinógeno, triglicéridos, complejos Ag-Ac y otras sustancias.
Aplicable cuando la dispersión es suficientemente grande (concentración alta de partículas).
Mide la luz dispersada en dirección distinta a la luz emitida (generalmente con ángulos que oscilan entre 15 y 90º).
Utiliza como instrumento el nefelómetro (en el que el detector se ubica con un ángulo que oscila entre 15 y 90º ej. a 90º).
Se suele utilizar para concentraciones más diluidas.
Permite mayor sensibilidad con concentraciones menores de partículas suspendidas.
Constituye un método más exacto para la medida de la opacidad.
Preferible para concentraciones bajas de partículas, ya que la dispersión es menor y la disminución de intensidad del haz incidente es pequeña.
Se suele utilizar para medir concentraciones específicas de colonias de bacterias en algún medio de cultivo, o de muchas proteínas utilizando el principio de dispersión luminosa molecular.
Dentro de los fenómenos llamados luminiscencia se encuentran el de fluorescencia, fosforescencia y quimioluminiscencia.
Dentro de los fenómenos llamados luminiscencia se encuentran el de fluorescencia, fosforescencia y quimioluminiscencia.
Fluorescencia
Es la luminiscencia causada única y exclusivamente por rayos ultravioleta.
El término fluorescencia proviene del mineral que presenta este fenómeno por naturaleza, la fluorita.
El término fluorescencia proviene del mineral que presenta este fenómeno por naturaleza, la fluorita.
La fluorescencia se produce cuando una molécula absorbe luz de una determinada longitud de onda (energía), y emite luz de una longitud de onda superior (menor energía).
Cuando una molécula es excitada por un haz de luz de una intensidad y energía determinadas, absorbe energía y se produce el paso de sus electrones de un estado basal a un estado excitado, liberando esta energía en forma de luz, resultando en una emisión fluorescente o fluorescencia.
Técnica espectrofotométrica que se basa en la absorción de radiación por parte del analito a medir en una muestra y su posterior emisión.
En bioquímica clínica:
Muestras biológicas de iones, enzimas, coenzimas, vitaminas, algunos medicamentos, etc.
Su gran aplicación es el fluoroinmunoanálisis que utiliza Ac marcados con una sustancia fluorescente, específicos de la sustancia a estudiar.
Fosforescencia
La fosforescencia es un fenómeno en el cual ciertas sustancias tienen la propiedad de absorber energía y almacenarla, para después emitirla gradualmente en forma de luz .
El principio físico en el que se basa la fosforescencia es el mismo que el de la fluorescencia, la principal diferencia radica en la forma de emitir la luz absorbida.
En la fluorescencia es casi simultánea, y en la fosforescencia es retardada.
En la fluorescencia es casi simultánea, y en la fosforescencia es retardada.
Quimioluminiscencia
Fenómeno que en algunas reacciones químicas, la energía liberada no sólo se emite en forma de calor o de energía química sino en forma de luz.
Normalmente, en estas reacciones de quimioluminiscencia se liberan moléculas con estado excitado que al bajar a su estado emiten la diferencia de energía en forma de luz.
A medida que progresa la reacción, los cambios de la composición química y la luz, disminuyen hasta desvanecerse por completo como resultado de la conversión.
Generalmente la quimioluminiscencia es muy breve.
Espectrofotometría de absorción atómica
Es una técnica para determinar la concentración de un elemento metálico determinado en una muestra.
Refractometría
Es una técnica analítica que consiste en la medida del índice de refracción de un líquido con objeto de investigar su composición si se trata de una disolución o de su pureza si es un compuesto único.
En el laboratorio de análisis clínicos se emplea el refractómetro para la medición de la concentración de solutos tales como la albúmina en muestras séricas y/o plasmáticas, y la medida del peso específico en orina.
Reactivos para química seca
Los reactivos de química seca constituyen la manera de introducir la muestra en los fotómetros de reflexión.
Son unidades de reacción con una fase sólida: poseen en forma deshidratada, todos los componentes que se necesitan para la identificación de un analito determinado.
Son unidades de reacción con una fase sólida: poseen en forma deshidratada, todos los componentes que se necesitan para la identificación de un analito determinado.
Modo de empleo: la muestra que contiene el analito a determinar (suero, plasma, sangre total, orina) se aplica sobre la superficie del reactivo en fase sólida, y a partir de esta difunde a la matriz, disolviendo los componentes de reacción que contiene; cuando los reactivos se disuelven se produce la reacción, que se cuantificara por fotometría de reflectancia.
Todos los sistemas constan de tres partes:
Parte soporte
Está constituida por una lámina de plástico, sobre la cual se construye el reactivo de fase sólida.
Parte reflectante
Su función es reflejar la luz; está hecha de materiales reflectantes como metales, o materiales fibrosos como el papel.
Parte reactiva
Contiene, en forma deshidratada todos los reactivos y sustancias auxiliares necesarias para que se produzca una reacción.
Los reactivos son reconstituidos mediante rehidratación por el agua de la muestra
Los reactivos son reconstituidos mediante rehidratación por el agua de la muestra
A veces se añaden otras capas con funciones complementarias como una capa difusora (con lo cual la muestra difunde rápidamente hacia los laterales y se distribuye uniformemente) o una capa separadora de plasma (la utilizan los sistemas preparados para trabajar con sangre total, su función es retener las células y permitir el paso del plasma hacia la matriz del reactivo).
La estructura de las capas depende del sistema reactivo de fase solida que se trate, variando de unos a Otros.
Tiras reactivas
Se utilizan para:
-análisis de orina
-autocontrol de la glucemia
-en sistemas de diagnóstico rápido en la consulta médica y a la cabecera del enfermo.
Consisten, básicamente en un soporte de plástico que sirve de soporte a una matriz de celulosa que contiene los reactivos secos necesarios para que se produzca una reacción con el componente a estudiar.
Tira reactiva del sistema Seralyzer (Ames): consiste en una matriz de celulosa impregnada de reactivos secos que se unen a una lamina soporte de plástico; sobre ella lleva una franja código, que tiene como finalidad ser leída cuando se la inserta en el instrumento.
Tira reactiva del sistema Reflotron (Boheringer Mannheim): consta de una lámina soporte al cual se le adhiere el sistema reactivo separado en dos zonas:
-una está unida a la lamina. Incluye una serie de capas destinadas a la preparación de la muestra.
-la otra se encuentra inicialmente separada de la lámina soporte, y se pone en contacto con ella por simple presión cuando se desea que el plasma entre en contacto con los reactivos para desencadenar la reacción; esta zona lleva en su superficie una laminilla transparente a través de la cual se realizara la lectura.
La disposición en dos bloques hace posible que la parte destinada a la preparación de la muestra se puedan llevar a cabo etapas de preincubación o eliminación de interferentes.
Esta tira incorpora también una capa separadora de fibra de vidrio para la obtención de plasma, con lo cual evitamos la centrifugación previa al análisis.
Ventajas de las tiras: al mantener los reactivos deshidratados aportan una prolongada estabilidad al sistema, que puede ser de meses e incluso de uno o dos años.
Películas multicapa o slides
Están constituidas por diferentes capas muy finas, a través de las cuales se van produciendo todas las etapas necesarias para la determinación cuantitativa del analito. Tiene la apariencia de una diapositiva y está constituido por cuatro capas (que incluyen todos los componentes del sistema). El sistema de más amplia implantación es el Ektachem (Kodak).
Capa difusora: sobre ella se deposita la muestra. Lleva sustancias capaces de reflejar la luz, es la superficie reflectante. Homogeneíza la muestra antes de que llegue a la capa reactiva, distribuyéndola por toda la superficie. Retiene células, cristales y pequeñas y grandes moléculas, así la muestra se convierte en un filtrado libre de proteínas, eliminándose las interferencias.
Capa reactiva: pueden ser una o varias, son las que contienen los reactivos.
Capa soporte: está hecha de plástico transparente y sobre ella se depositan todas las demás capas una tras otra. Tiene doble función: servir de soporte y dejar pasar la luz, ya que la lectura se hace por la parte inferior (la opuesta a la de la aplicación de la muestra).
La cromatografía es un método físico de separación en el que los componentes que se han de separar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales está en reposo (fase estacionaria, F.E.) mientras que la otra (fase móvil, F.M.) se mueve en una dirección definida.
Agrupa un importante y diverso conjunto de métodos que permiten separar componentes que estén estrechamente relacionados en muestras complejas.
Electroforesis
La mayoría de las biomoléculas poseen una carga eléctrica, cuya magnitud depende del pH del medio en el que se encuentran.
Como consecuencia, se desplazan cuando se ven sometidas a un campo eléctrico.
Como consecuencia, se desplazan cuando se ven sometidas a un campo eléctrico.
Se denomina electroforesis a la técnica mediante la cual se separan las biomoléculas en disolución cuando se ven sometidas a un campo eléctrico.
Se trata de una técnica fundamentalmente analítica, aunque también se puede realizar con fines preparativos.
Se trata de una técnica fundamentalmente analítica, aunque también se puede realizar con fines preparativos.
Cada molécula se desplaza por efecto del campo, alcanzando rápidamente una velocidad constante al equilibrarse la fuerza impulsora (fuerza del campo eléctrico) con la resistencia al avance (fuerza de fricción o rozamiento) impuesta por el medio en el que se desplaza.
Otras aplicaciones - de forma semejante a la electroforesis de proteína, también se realizan con frecuencia en el laboratorio, la de otras sustancias de gran interés clínico => lipoproteínas, hemoglobina y otras susceptibles de ionización en función del pH.
Técnicas de biología molecular
Se aplican en el laboratorio clínico (microbiologia, bioquimica, hematología etc.) para el diagnostico de patologías de origen genetico de las que es conocido el gen causante; se basan en la capacidad de los acidos nucleicos de auto-reconorse => detectar y unirse unica y exclusivamente a su secuencia complementaria; capacidad de auto-duplicarse; se usan en técnicas de transferencia de Southern Blot y de Northern Blot y las técnicas de ampliación de ácidos nucleicos mediante RCP/PCR para el diagnostico de enfermedad infecciosas, análisis de paternidad y un patrón de huellas de ADN;
http://biomodel.uah.es/tecnicas/elfo/inicio.htm
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